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用水浴锅做质粒DNA提取的实验方法

点击次数:2703   发布时间:2018/1/4 10:51:36

 
       实验方法原理 质粒多为一些双链、环状的DNA分子,是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作,进行遗传工程改良物种等工作时*主要的DNA载体。

提取质粒的基本步骤分为三步:

①细菌的培养和质粒的扩增

②细菌菌体的裂解

③质粒DNA的纯化

实验材料        

大肠杆菌

试剂、试剂盒:ris-Hcl EDTA葡萄糖 NaOHKAacNaAc异丙醇LB培养基

仪器、耗材:超净工作台、培养箱 摇床恒温水浴锅、台式离心机、取液器、低温冰箱、冷冻真空干燥机、电泳仪、水平电泳槽、紫外观测仪

实验步骤

一、材料与试剂准备

       1.  材料:大肠杆菌。

       2.  仪器:超净工作台,培养箱,摇床,恒温水浴锅,台式离心机,取液器一套,低温冰箱,冷冻真空干燥机,电泳仪,水平电泳槽,紫外观测仪。

       3.  试剂:

      1Solution I 25 mM Tris-Hcl(pH7.4)10 mM EDTA(pH8.0)50 mM葡萄糖,高压灭菌,4℃保存。

      2Solution II 0.2 M NaOH, 1%SDS 现配现用。

      3Solution III 5 N KAc pH4.8,高压灭菌,4℃保存。

      43 M NaAc pH5.2,高压灭菌,4℃保存。

      5)异丙醇,溶菌酶(8 mg/ml),无水乙醇,70%乙醇,LB培养基,电泳试剂。

原创作者:上海喆图科学仪器有限公司

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